O papel do módulo miR396-GRF-GIF no surgimento de flores anormais em Coffea arabica
GRF, miRNA, estrelinhas, Coffea arabica
O café, produzido a partir das sementes de Coffea arabica L. e Coffea canephora é uma das principais commodities exportadas pelo Brasil, extremamente importante para a economia do país. Apesar disso, muito ainda não se sabe a respeito dos mecanismos genéticos que estão diretamente relacionados à sua produtividade, como os responsáveis pela produção das “estrelinhas”, flores anormais que desenvolvem órgãos atrofiados, descritas como inférteis. A família de genes Growth-regulating factors (GRFs) codifica fatores de transcrição envolvidos, associados aos seus coativadores GRF-interacting factors (GIFs), na regulação do crescimento e desenvolvimento de diversos órgãos vegetais, tais como caule, folhas e flores, e, portanto, representam um importante alvo de estudo, especialmente em espécies de grande interesse econômico. Sendo assim, o objetivo deste trabalho será o de identificar e caracterizar essas importantes famílias de genes em Coffea arabica, principal espécie cultivada. Para esse propósito, sequências proteicas de GRFs e GIFs já identificadas em outras espécies de plantas foram obtidas de bancos de dados da internet e utilizados como referência em alinhamentos contra o proteoma de C. arabica. Buscas foram feitas pelos domínios conservados presentes nas sequências candidatas. Para a elucidação das relações de homologia entre os genes identificados no cafeeiro e os que já foram caracterizados em outras espécies, duas árvores filogenéticas foram construídas, uma para cada família. As sequências promotoras dos genes foram analisadas para a identificação dos elementos regulatórios presentes. A expressão dos genes foi avaliada por meio de cálculos da abundância relativa de seus transcritos em bibliotecas validadas de RNA-Seq de diferentes órgãos em crescimento, e utilizados na elaboração de um mapa de calor. Dez genes GRF e seis genes GIF foram identificados e nomeados CaGRF1 a 10 e CaGIF1 a 6, sendo a presença dos domínios característicos confirmada em suas respectivas proteínas. Através da árvore filogenética gerada foi possível inferir, com base em homologia, as possíveis funções realizadas pelos genes identificados. A análise de promotores revelou a presença de elementos responsivos a fitormônios diversos, como auxinas, giberelinas, citocininas, ácido abscísico, e ao ácido jasmônico. O mapa de calor indicou os diferentes níveis de expressão de cada gene em cada tecido avaliado, ilustrando a diversidade de papéis exercidos pelos membros dessas famílias. MiRNAs da família miR396 com capacidade de atuar sobre os genes identificados, e seus respectivos genes-alvo, terão sua expressão quantificada por RT-qPCR de tecidos de flores de C. arabica normais e anormais coletados de plantas adultas situadas na fazenda experimental da Inova Café na UFLA, em Lavras-MG. Espera-se que os experimentos resultem na identificação de fatores genéticos responsáveis, ao menos parcialmente, pelo desenvolvimento de flores atrofiadas de C. arabica. Novos conhecimentos serão gerados e servirão como base para outros estudos que culminarão no aperfeiçoamento da qualidade e da produção do café.