Análise genômica comparativa de elementos repetitivos em espécies de Cenchrus L.
Cenchrus, DNA Repetitivo, Hibridização in situ fluorescente
Cenchrus L. é um importante gênero da família Poaceae que abriga diversas espécies de elevada importância agronômica, como Cenchrus purpureus e Cenchrus americanus, duas espécies que se destacam na produção de forragem e de grãos, respectivamente. Diversos programas de melhoramento já foram estabelecidos visando introgredir alelos favoráveis à produção de massa seca a partir de espécies selvagens às cultivadas. Estudos genômicos utilizando sequenciamento de próxima geração (NGS) vem se mostrando uma interessante ferramenta para caracterização do germoplasma disponível em tais programas de melhoramento. Esses estudos se dividem em diversas vertentes que possuem aplicações desde a identificação de novos arranjos gênicos até o estabelecimento mais preciso de relações filogenéticas entre as espécies envolvidas. Uma dessas vertentes é a identificação e classificação de sequências de DNA repetitivo. Essas sequências chegam a ocupar cerca de 90% do genoma de espécies vegetais e podem estar envolvidas em processos que vão desde a regulação gênica até alterações cromossômicas estruturais. Todo esse dinamismo e rápida evolução levam essas sequências a serem interessantes marcadores cromossômicos e filogenéticos, permitindo novos insights acerca dos processos evolutivos que moldaram a relação de espécies cultivadas, como C. purpureus e C. americanus. Portanto, o objetivo do presente trabalho é a caracterização in silico da fração repetitiva do genoma de Cenchrus purpureus e Cenchrus americanus, assim como a localização cromossômica das sequencias mais abundantes, tanto nas espécies de origem como nas relacionadas. Para tanto, o DNA genômico de C. purpureus e C. americanus será extraído utilizando kit de extração Qiagen DNeasy Plant Mini Kit para posterior sequenciamento em plataforma Illumina Hiseq 4000. As análises bioinformáticas serão feitas na plataforma RepeatExplorer, no qual serão identificados e quantificados os elementos repetitivos presentes no genoma das duas espécies. As sequencias mais abundantes serão selecionadas, amplificadas por PCR e marcadas com fluorocromos por meio da técnica de Nick Translation para posterior localização nos cromossomos de espécies de Cenchrus por meio da técnica de Hibridização in situ fluorescente. Os resultados obtidos serão utilizados na reconstrução do estado ancestral dessas sequencias através de softwares de estabelecimento de relações filogenéticas.