Mapeamento físico de sequências satélite de espécies silvestres de Solanum
DNA repetitivo, FISH, cromossomo
A batata (Solanum tuberosum L., Solanaceae) é a quarta cultura mais importante do planeta. A busca por novas cultivares tem como possiblidade o uso de espécies silvestres como fonte de alelos de interesse para o melhoramento da batata cultivada, dentre elas a espécie triploide nativa do Brasil, S. calvescens. No entanto, a origem e status taxonômico de S. calvescens são controvertidos. Para o uso eficiente dessa espécie na introgressão de alelos desejáveis, é importante definir sua circunscrição taxonômica e sua origem, ou seja, qual ou quais genomas ela possui. A caracterização da fração repetitiva do DNA de S. calvescens e espécies selvagens próximas (S. chacoense, S. malmeanum e S. commersonii) revelou que ela apresenta menor porcentagem de DNA repetitivo que as demais e que existem sequências satélite específicas das diferentes espécies estudadas. O objetivo deste trabalho é fazer o mapeamento físico das sequências satélite identificadas para inferir sobre a evolução cromossômica desse grupo. Pontas de raiz serão coletadas de plantas mantidas em vasos, sujeitas a bloqueio do fuso mitótico com hidroxiquloneina, fixadas em solução 3 etanol: 1 ácido acético e armazenadas a -20º C. As lâminas serão preparadas com secagem à chama com meristemas submetidos previamente a digestão enzimática da parede celular. As melhores lâminas serão usadas nos experimentos com FISH (Hibridização in situ fluorescente) para localização de sequências satélite obtidas por reação de PCR com primers específicos. As lâminas serão avaliadas em microscópio de fluorescência, com os filtros adequados aos fluorocromos usados, para análise comparativa do padrão de bandas.