ANÁLISES COMPARATIVA E FILOGENÉTICA DE SEQUÊNCIAS REPETITIVAS DE DNA E DO GENOMA CLOROPLASTIDIAL EM ESPÉCIES DE Piper L.
Piper aduncum. Piper hispidinervum. Piper aff. hispidinervum. Elementos repetitivos. Sequenciamento.
Piper L. é considerado um dos maiores gêneros da família Piperaceae e apresenta espécies com elevada importância socioeconômica, incluindo as produtoras de óleos essenciais, como Piper aduncum, Piper hispidinervum e Piper aff. hispidinervum. Esses táxons apresentam uma classificação taxonômica não bem definida por possuírem características morfológicas e citogenéticas muito similares. A fim de identificar caracteres que auxiliem na caracterização e separação entre eles, objetivou-se realizar uma análise comparativa e filogenética da fração repetitiva de DNA e do genoma cloroplastidial desses três táxons. Os DNA genômicos foram sequenciados na plataforma Illumina e as análises das sequências repetitivas foram realizadas na pipeline do RepeatExplorer. DNA satélites foram identificados e a similaridade das sequências foi determinada pelo alinhamento MAFFT no software UGENE. Sequências de aminoácidos dos domínios proteicos conservados da superfamília Ty3-Gypsy foram extraídas e as relações filogenéticas foram estabelecidas pelo método Neighbor-Joining com valores de 10.000 bootstrap. Os genomas de cloroplastos foram montados no NOVOPlasty, anotados via GeSeq-CHLOROBOX e Geneious Prime e os mapas gráficos circulares obtidos no OrganellarGenomeDRAW. As sequências dos genomas cloroplastidiais foram alinhadas com MAFFT e a árvore filogenética foi construída com 20 espécies de Piper pelo método de Máxima Verossimilhança (ML), adotando valores de 100 bootstrap. A fração repetitiva representou cerca de 60% do genoma de P. hispidinervum, 62% de P. aduncum e P. aff. hispidinervum, e os retrotransposons foram a classe mais abundante. As superfamílias Ty3-Gypsy e Ty1-Copia foram as mais representativas da ordem LTR e a família EnSpm-CACATA dos transposons. DNA satélites foram identificados em todos os genomas e foram classificados em nove famílias, não havendo similaridade entre eles. Apenas o satélite PafSat1 foi compartilhado em todos os táxons, enquanto os satélites PadSat1e PadSat2 foram exclusivos de P. aduncum. A superfamília Ty3-Gypsy formou seis clados com linhagens comuns da retrotransposase entre os táxons. O genoma do cloroplasto de Piper possui estrutura quadripartida, formada pela pequena região de cópia única (SSC), regiões de repetições invertidas (IRa e IRb) e grande região de cópia única (LSC). P. aduncum apresentou genoma com tamanho de 161.719 pb, constituído por 93 genes codificadores de proteínas, 62 RNAt e 8 RNAr. P. hispidinervum e P. aff. hispidinervum apresentaram tamanhos de 161.287 e 161.257 pb, respectivamente, e ambos com 88 genes codificadores de proteínas, 34 RNA transportadores e sete RNA ribossômicos. Os genomas cloroplastidiais de P. hispidinervum e P. aff. hispidinervum foram mais próximos entre si e mais distantes de P. aduncum, indicando que P. hispidinervum é uma espécie distinta de P. aduncum e P. aff. hispidinervum um ecótipo de P. hispidinervum.