MICROSCOPIC AND MOLECULAR STUDIES IN THE BIOLOGICAL CONTROL OF RICE BLAST DISEASE CAUSED BY Pyricularia oryzae WITH ENDOPHYTIC Bacillus sp., Epicoccum nigrum, AND Penicillium citrinum
P. oryzae, BRSMG Caçula, Bacillus sp., E. nigrum, P. citrinum, biocontrole, incidência e severidade, promoção de crescimento, rendimento, microscopia, indução de resistência.
O presente estudo intitulado “Estudos microscópicos e moleculares no controle biológico da brusone do arroz causada por P. oryzae com endófitos Bacillus sp., E. nigrum e P. citrinum” foi realizado durante o segundo semestre de 2018. Os objetivos dos experimentos foram avaliar o potencial de controle biológico dos endófitos microbianos contra a brusone do arroz causada por P. oryzae na cultivar de arroz (Oryza sattva L.) BRSMG Caçula; sua capacidade de melhorar o crescimento vegetativo e a produtividade; sua interação com a planta, bem como analisar a capacidade de Bacillus sp. BMH para estimular os mecanismos de defesa da planta usando análise microscópica e molecular. Os experimentos foram realizados em casa de vegetação. As observações feitas foram baseadas na incidência e severidade dos sintomas fenotípicos observados nas plantas, crescimento, número de perfilhos, panículas e rendimento. O microscópio confocal a laser (CLM), o microscópio eletrônico de varredura (SEM) e o microscópio Epi-fluorescência (EFM) foram utilizados para analisar a interação das plantas de arroz com os endófitos microbianos. Solo e sementes de arroz foram inoculados com Bacillus sp. BMH e as sementes foram pulverizadas com os isolados 10965 e IA25 de P. oryzae. A avaliação da severidade mostrou que o BMH foi capaz de reduzir a severidade do brusone do arroz em 53,12%, 50% e 37,5% para inoculação do solo, tratamento foliar preventivo e mistura de patógeno-BMH, respectivamente, aos 28 dias após a inoculação (DAI). A altura das plantas de arroz foi maior nos tratamentos com Bacillus sp. BMH inoculados em solo, 25,73 cm em comparação ao tratamento controle, 21,93 cm aos 63 DAS. Da mesma forma, o número de perfilho com inoculação de Bacillus sp. BMH em solo (12,6) foi superior ao controle não tratado (9,13). Isso se correlacionou com o peso do grão de 10,17 g e 9,4 g para tratamentos de solo com Bacillus sp. BMH contra 7,14 g para o não tratado. CLM e SEM mostraram a colonização de tecidos vasculares da raiz e das folhas de arroz por células de Bacillus sp. BMH, demonstrando seu potencial endofítico. No estudo molecular, o tratamento de sementes de Bacillus sp. BMH resultou na estimulação dos mecanismos de defesa das plantas contra a brusone por meio da regulação positiva dos genes β-1,3-glucanases (OsGLN1), OsPR1a, e OsWRKY28do arroz, que estão envolvidos na defesa, crescimento, desenvolvimento e outros estressores. O recobrimento da semente de arroz com E. nigrum e sua pulverização foliar preventiva reduziram significativamente a taxa de incidência de brusone com 41,76% a 31,25% respectivamente, e a severidade com taxas de 54,51% a 34,92%. Em relação ao crescimento, verificou-se que a embebição das sementes com E. nigrum proporcionou a aptidão da planta e aumentou o número de perfilho para 8,34 contra 5,95 no tratamento controle. SEM e EFM mostraram a colonização da superfície das raízes do arroz por E. nigrum demonstrando sua habilidade endofítica. Nos últimos ensaios com as cepas GP1 e GP3 de P. citrinum, as sementes do consórcio embebidas ou pulverizadas nas folhas, diminuíram significativamente a severidade do brusone com taxas de 33,34% a 37,4%, respectivamente. Na promoção do crescimento da planta, o consórcio aumentou significativamente o número de perfilhos do arroz com 11,25 contra 10,17, respectivamente. O uso individual ou sinérgico não teve efeito na altura da planta em comparação ao não tratado. Da mesma forma, seu uso individual em sementes não afetou o número de panículas e o rendimento da planta em comparação com as não tratadas. Ambos os isolados fúngicos, GP1 e GP3, colonizaram os tecidos das raízes do arroz demonstrando sua habilidade endofítica. Dois isolados de Epicoccum (de videira e milho) e dois de Penicillium de videira (GP1 e GP3) usados neste estudo foram identificados como E. nigrum, P. citrinum com base nas regiões ITS, RPB2, β-TUB2 e LSU do rDNA homologia de sequência e análises filogenéticas.
Os Experimentos em estufa confirmaram que Bacillus sp. BMH, E. nigrum e P. citrinum melhoraram a aptidão do arroz enquanto diminuíram a taxa de severidade da brusone. Os efeitos benéficos desses endófitos estudados no manejo da brusone, com suas excelentes habilidades antifúngicas e biofertilizantes, podem ter sua aplicação como novos biofungicidas no manejo de culturas, enquanto diminui o uso de insumos químicos, resistência a patógenos, riscos ambientais, entre outras.