Banca de QUALIFICAÇÃO: GUILHERME ANTONIO DE GOUVÊA LOPES

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: GUILHERME ANTONIO DE GOUVÊA LOPES
DATA: 29/08/2025
HORA: 15:00
LOCAL: Sala de reuniões PPGCV
TÍTULO:

ANÁLISE PROTEÔMICA DE SÊMEN CRIOPRESERVADO DE Prochilodus lineatus: EFEITOS DA MELATONINA NA PRESERVAÇÃO DA QUALIDADE SEMINAL

PALAVRAS-CHAVES:

congelamento, gametas, antioxidante, peixes

PÁGINAS: 38
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Medicina Veterinária
RESUMO:

Este trabalho teve como obejtivos investigar os efeitos da melatonina na criopreservação do sêmen de Prochilodus lineatus por meio da análise proteômica, com o intuito de elucidar os mecanismos moleculares envolvidos na ação desse antioxidante sobre a qualidade seminal após o descongelamento. Machos de Prochilodus lineatus (n = 9, ~4 anos) foram selecionados em viveiros da CEMIG (Itutinga-MG) e induzidos à espermiação com CPE (4 mg/kg) durante a temporada reprodutiva de 2022/2023. O sêmen foi coletado, mantido sob refrigeração (~6–9 °C) e avaliado subjetivamente quanto à motilidade, vigor, integridade de membrana (coloração nigrosina-eosina) e morfologia (Rosa Bengala), sendo utilizadas apenas amostras com ≥90% de motilidade. As amostras foram criopreservadas (PSC) com meio contendo glicose 5%, metilglicol e melatonina 2 mM (PSCM), envasadas em palhetas (0,5 mL), congeladas em vapor de N₂ e armazenadas a −196 °C. Após descongelamento (60 °C/8s), os parâmetros espermáticos foram reavaliados. Para a análise proteômica, o sêmen foi centrifugado, precipitado com solução orgânica e preparado com tampão Tris-HCl, ureia e octil glicosídeo. A quantificação de proteínas foi feita pelo método de Bradford; a preparação para espectrometria envolveu redução/alquilação, digestão com tripsina e limpeza. As amostras foram analisadas em espectrômetro Orbitrap Eclipse, e os dados processados considerando proteínas em upregulation (≥2x) ou downregulation (≤0,5x), com base em funções moleculares e biológicas significativas (FDR). A análise estatística foi conduzida no R (v. 4.4.1) com ANOVA e Student–Newman–Keuls (P < 0,05). A adição de melatonina ao sêmen criopreservado aumentou significativamente a duração da motilidade espermática (77,4 ± 17,5 s) em comparação ao método padrão de congelamento (49,8 ± 22,6 s) (P = 0,006). Observou-se uma redução no defeito de cauda fortemente enrolada no grupo tratado com melatonina (P < 0,05), indicando um efeito benéfico do antioxidante na qualidade espermática pós-descongelação. A downregulation de enzimas envolvidas no metabolismo energético e no dobramento proteico no sêmen criopreservado (PSC) em relação ao fresco (PSF) sugere um comprometimento das vias bioquímicas essenciais à fertilidade. Enzimas do Ciclo de Krebs, glicólise e fosforilação oxidativa apresentam expressões reduzidas, limitando a geração de ATP e NADH, o que compromete a motilidade e a integridade mitocondrial. Além disso, a downregulation de chaperonas e proteínas de choque térmico afeta o enovelamento proteico, resultando em acúmulo de proteínas mal conformadas e estresse do retículo endoplasmático, aumentando o risco de apoptose. Esses dados indicam que a criopreservação induz um estresse metabólico multifatorial, dificultando a recuperação da funcionalidade espermática pós descongelamento, com implicações diretas para a fertilidade. A melatonina promove a upregulation quando comparada ao grupo controle (PSC) de proteínas que se ligam a nucleotídeos e enzimas antioxidantes, como peroxiredoxin 1, que neutralizam o estresse oxidativo. Ela também estimula a expressão de chaperonas moleculares, garantindo o correto dobramento de proteínas. No aspecto energético, a upregulation de enzimas como MDH1 e CS potencializa a produção de ATP, favorecendo a motilidade espermática. Além disso, proteínas associadas à reparação de DNA e à regulação do cálcio intracelular são mais expressas no grupo com melatonina, contribuindo para a estabilidade genética dos espermatozoides. A maior expressão de proteínas do citoesqueleto reforça a estrutura flagelar e a motilidade. Esses efeitos sinérgicos indicam que a melatonina trás efeitos benéficos, promovendo a integridade estrutural, metabólica e genética do sêmen criopreservado. CONCLUSÃO A adição de melatonina na criopreservação do sêmen demonstra um impacto positivo na duração da motilidade espermática e na qualidade celular, evidenciando seu papel como um agente antioxidante e protetor. Os resultados indicam que a melatonina promove a regulação positiva de proteínas essenciais para a integridade estrutural e funcional dos espermatozoides. A capacidade da melatonina de mitigar o estresse metabólico e promover a expressão de enzimas e chaperonas críticas sugere que sua inclusão no processo de criopreservação pode ser uma estratégia eficaz para melhorar a fertilidade.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - WILLIAM FRANCO CARNEIRO - UFLA (Membro)
Externo à Instituição - NAIARA CRISTINA MOTTA - UFLA (Suplente)
Externo à Instituição - IVO VIEIRA DE SOUSA NETO - FMRP (Membro)
Presidente - LUIS DAVID SOLIS MURGAS (Membro)