Caracterização dos fatores de transcrição bZIPs-S em cana-de-açúcar.
CRISPR-cas9, transformação genética, sacarose.
A cana-de-açúcar é uma cultura agrícola de grande importância para a economia brasileira, destacando-se na liderança da produção global com 25% do total mundial e uma média produtiva de 45,54 milhões de toneladas ao ano. Essa cultura é crucial em diversas aplicações industriais, servindo não apenas como a principal fonte de açúcar, mas também como uma base para produção de biocombustíveis, especialmente o etanol. Devido a esses fatores, a cana-de-açúcar tem sido alvo de ferramentas biotecnológicas, como a edição gênica, com o objetivo de aumentar a produtividade e agregar características de interesse econômico. Considerando que modificações em regiões específicas dos fatores de transcrição bZIPs (basic leucine zipper) podem alterar a regulação pós-transcricional e elevar a expressão de genes envolvidos na síntese de sacarose, este trabalho tem como objetivo realizar uma mutagênese direcionada em genes bZIPs de classe S de cana-de-açúcar, utilizando a técnica CRISPR-Cas9, para aumentar a concentração de açúcares. Além disso, busca-se caracterizar interações gênicas com base em dados públicos de RNA-seq. Os genes bZIPs serão identificados e usados como alvos para construção gênica com RNAs-guias direcionados à edição de suas regiões regulatórias. O material vegetal, com 8 a 10 meses de idade, será coletado em casa de vegetação para inoculação in vitro. Folhas imaturas serão desinfetadas e colocadas em placas de Petri contendo meio MS suplementado com 2,4-D para indução de calos, e, após três subcultivos, os calos selecionados serão transformados via Agrobacterium tumefaciens. A seleção dos eventos será feita por resistência a herbicida e testes moleculares, como PCR e sequenciamento Sanger da região alvo. As plantas editadas serão submetidas à quantificação de sacarose para validação dos dados. Espera-se obter plantas de cana-de-açúcar com maior teor de sacarose, além de contribuir para o entendimento funcional dos genes bZIPs de classe S em cana-de-açúcar.