PURIFICAÇÃO DE L-ASPARAGINASE DE Aspergillus Caespitosus EM CRIOGÉIS DE TROCA IÔNICA
adsorção; enzima; cromatografia
A L-asparaginase (EC 3.5.1.1) catalisa a hidrólise da L-asparagina em ácido aspártico e amônia, ajudando a reduzir os níveis de acrilamida, um composto potencialmente carcinogênico, em alimentos ricos em carboidratos. Todavia, para conseguir isolar solutos de interesse, como as proteínas, com um certo grau de pureza, técnicas cromatográficas têm sido bastante empregadas. Criogéis poliméricos são considerados excelentes matrizes cromatográficas, que apresentam alta capacidade de adsorção com alta eficiência. Neste contexto, criogéis de poliacrilamida serão funcionalizados com riboflavina e niacinamida, visando a captura e pruficação de L-asparaginase de Aspergillus caespitosus CCDCA 11593, via cromatografia de troca iônica. O efeito da concentração de tampão fosfato de sódio (0,025 mol/mL e 0,100 mol/mL) e do pH (3,0 5,0 e 8,0) na adsorção da L-asparaginase será avaliado. A morfologia, os grupos funcionais, a densidade de grupos epóxi, o ponto de carga zero e propriedades mecânicas e térmicas dos criogéis de troca iônica serão avaliadas. A captura cromatográfica da L-asparaginase, utilizando a coluna monolítica que apresentar melhor resultado de capacidade adsortiva, será estudada em função de diferentes vazões (0,5 mL/min, 1 mL/min e 1,5 mL/min) de bombeamento, sendo determinados rendimento e fator de purificação. Ao final, a proteína eluída será caracterizada por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil de sulfato de sódio (SDS-PAGE).