Banca de QUALIFICAÇÃO: PALOMA CARMELINA DA SILVA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: PALOMA CARMELINA DA SILVA
DATA: 03/12/2021
HORA: 08:00
LOCAL: on line - Google Meet
TÍTULO:

Transformação genética de Coffea Canephora por embriogênese somática direta via tecnologia CRISPR-Cas9 mediante o silenciamento do gene CcPds

PALAVRAS-CHAVES:

Edição genética, Cultivo in-vitro, Clone 14, Clone 22

PÁGINAS: 50
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Agronomia
RESUMO:

Coffea Canephora representa 38% da produção de café no mundo, a espécie contém maiores teores de cafeína e sabor amargo, sendo muito utilizada na produção de café solúvel. Agronomicamente é uma espécie rústica, mais resistente a pragas, doenças e déficit hídrico. Por tais fatores, clones de C. Canephora vem sendo altamente utilizados em programas de melhoramento genético do cafeeiro.  A embriogênese somática (ES) é um processo que permite a propagação em larga escala de variedades, além de ser um suporte para ensaios de transformação genética. O sucesso da E.S é totalmente dependente do genótipo utilizado, bem como o tipo de protocolo de indução. A técnica permite a regeneração de plantas tanto por embriogênese somática indireta, quando ocorre formação de calos e posteriormente de embriões, bem como por embriogênese somática direta, quando os embriões são formados diretamente a partir do tecido inoculado, reduzindo em muito o prazo para obtenção das plântulas. Considerado como uma técnica recente de edição genética, CRISPR/Cas9 vem sendo amplamente utilizado com sucesso na edição genética de diversas espécies vegetais, incluindo em C. Canephora. Neste sentido, este trabalho tem por objetivo determinar um protocolo de transformação genética a partir da embriogênese direta de folhas de C. Canephora e validar a tecnologia CRISPR-Cas9 neste sistema mediante o silenciamento do gene CcPds. Para o experimento serão utilizadas folhas de C. Canephora clone 14 e clone 22 cultivados em Fitotron. Uma vez definido o meio de cultura mais responsivo na produção de embriões, será realizado o experimento para a transformação genética via tecnologia CRISPR/Cas9 visando o silenciamento do gene CcPds, de acordo com o protocolo proposto por Ribas et al (2011). Para a verificação da inserção do T-DNA no genoma vegetal, será realizado uma PCR para a amplificação da sequência do gene da Cas9. Plântulas e embriões confirmados quanto à inserção do T-DNA  contendo diferentes fenótipos (albinas, variegadas, verdes) e plantas controle serão novamente checadas quanto a presença ou não de mutações. Para tal, uma região de cerca de 500 pb flanqueando as regiões alvo será amplificada por PCR e posteriormente sequenciada. Ao final desta pesquisa espera-se determinar e adequar um protocolo de transformação genética de folhas de Coffea Canephora, utilizando a tecnologia CRISPR-Cas9.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - LUCIANO VILELA PAIVA (Membro)
Externo ao Programa - GILVANO EBLING BRONDANI - DCF/ESAL (Membro)
Externo à Instituição - RAFAELI APARECIDA VIEIRA DE SOUZA - UFLA (Suplente)
Externo à Instituição - BRENO RÉGIS SANTOS - UNIFAL (Membro)