Banca de DEFESA: NATÁLIA CHAGAS FREITAS

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: NATÁLIA CHAGAS FREITAS
DATA: 28/02/2019
HORA: 14:30
LOCAL: Anfiteatro da Administração – Bloco 2
TÍTULO:

SISTEMA CRISPR/CAS9 VISANDO A EDIÇÃO GENÔMICA NO ALOTETRAPLOIDE Coffea arabica

PALAVRAS-CHAVES:

Engenharia genética. Mutação. Silenciamento gênico. Café.

PÁGINAS: 1
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Agronomia
RESUMO:

A incorporação de técnicas biotecnológicas vem se tornando cada vez mais importante para o auxílio no melhoramento genético convencional, possibilitando avanços mais rápidos na obtenção dos genótipos superiores, com redução de tempo e custo. Ganhos significativos no melhoramento genético do cafeeiro podem ser alcançados com a edição genômica em Coffea arabica via tecnologia CRISPR/Cas9. A espécie detém a maior importância econômica do gênero Coffea e apresenta uma maior complexidade à nível genômico, já que é uma planta alotetraploide resultante da hibridação natural de C. canephora e C. eugenioides. O silenciamento do gene PDS, que codifica a enzima fitoeno dessaturase, destaca-se como uma boa alternativa para validação do sistema, pois as plantas mutantes normalmente apresentam fenótipo distintamente visível. Nesse contexto, a proposta inicial do trabalho visou verificar a eficiência de edição genômica em C. arabica via tecnologia CRISPR/Cas9 utilizando como prova de conceito a mutação direcionada no gene PDS. Três vetores binários (pCOFEDIT-PDS3, pCOFEDIT-PDS5 e pCOFEDIT-PDS14) foram utilizados para cotransformação de calos embriogênicos via Agrobacterium tumefaciens. Foram obtidos embriões somáticos transgênicos até o estádio cotiledonar apresentando anormalidades fenotípicas e comprometimento nas etapas de crescimento e germinação. Devido ao não desenvolvimento satisfatório de plantas do material submetido à transformação, três embriões que apresentaram morfogênese anormal das folhas com clorose e integração do T-DNA confirmada, foram submetidos ao sequenciamento das regiões alvo. O sequenciamento em pequena escala dos transformantes não foi capaz de detectar mutações no material analisado. Em paralelo, o presente trabalho também visou obter plantas com baixo teor de cafeína pelo silenciamento múltiplo dos genes XMT, MXMT e DXMT, os quais codificam enzimas relacionadas à síntese da cafeína. Foi verificado a presença de transcritos da Cas9 em plantas submetidas à cotransformação com os vetores binários pCOFEDIT-XMT1, pCOFEDIT-XMT2 e pCOFEDIT-XMT3 via transformação genética estável. Essas plantas apresentaram teores normais de cafeína (1,1 a 1,4%) e juntamente com os dados de sequenciamento comprovaram a ausência de mutação em todos os alelos dos genes alvo. As plantas obtidas neste estudo servirão de base para a compreensão do fator limitante na funcionalidade do sistema CRISPR/Cas9 em C. arabica, permitindo definir quais aspectos serão necessários otimizar para a condução de futuros trabalhos.

 

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - LUCIANO VILELA PAIVA
Interno - ALAN CARVALHO ANDRADE
Externo à Instituição - FLAVIA BARBOSA SILVA BOTELHO - UFLA
Externo à Instituição - RAFAELI APARECIDA VIEIRA DE SOUZA - UFLA
Externo à Instituição - VAGNER AUGUSTO BENEDITO - UFLA
Externo à Instituição - HORLLYS GOMES BARRETO - UFT
Externo à Instituição - ANDERSON TADEU SILVA - WAGENINGEN