Banca de QUALIFICAÇÃO: TAMIRES LUANA SILVA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: TAMIRES LUANA SILVA
DATA: 14/08/2019
HORA: 14:00
LOCAL: Sala Agronomia - USP - Piracicaba - SP
TÍTULO:

Desenvolvimento de um protocolo de alta eficiência para obtenção e regeneração de protoplastos isolados a partir de suspensões celulares embriogênicas visando a edição gênica em Coffea canephora

PALAVRAS-CHAVES:

Protocolo, protoplastos, regeneração, embriogênese, CRISPR-Cas9, cafeína

PÁGINAS: 37
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Agronomia
RESUMO:

A tecnologia CRISPR-Cas9 é uma ferramenta de edição gênica direcionada amplamente utilizada por melhoristas da atualidade. Sua aplicação em espécies vegetais torna possível a obtenção de organismos geneticamente modificados livres de transgenes, dispensando grande parte da burocracia envolvida na liberação e comercialização destes espécimes juntamente com maior aceitação do público-alvo. Para tal, é necessário que a proteína Cas9 e o sgRNA sejam entregues ao meio intracelular de forma direta, dispensando a inserção de DNA exógeno no genoma da célula. Entretanto, as células vegetais apresentam como barreira física a parede celular, que dificulta a entrada destas moléculas. Uma alternativa que auxilia a transposição deste obstáculo é a utilização de protoplastos. O emprego destas células vegetais desprovidas de parede celular associado a um protocolo eficiente de regeneração em plantas, permite a realização de estudos como expressão gênica, metabolismo celular, além da manipulação genética. Os protocolos para obtenção de protoplastos são espécie-específicos e tem como maior restrição a regeneração destas células em plantas a partir de uma combinação adequada de diversos estímulos. A utilização de suspensões celulares embriogênicas eleva as chances de sucesso na regeneração de protoplastos em plantas, em decorrência da sua alta capacidade totipotente. Tendo em vista a grande importância econômica da cultura do café brasileiro somado, a disponibilidade de suspensão celular de calos embriogênicos de Coffea canephora, este projeto tem como principal pretenção o desenvolvimento de um protocolo eficiente e reprodutível de isolamento e regeneração de protoplastos para um genótipo elite de Coffea canephora. Para este fim, serão testadas diferentes enzimas no processo de digestão celular, condições de cultivo variadas e algumas combinações de reguladores de crescimento. Sequencialmente, os protoplastos obtidos possibilitarão a validação da aplicação do sistema CRISPR-Cas9 por entrega direta. No presente caso, os alvos almejados serão genes envolvidos na biossíntese da molécula de cafeína visando obtenção de frutos de café com baixo teor deste alcaloide, mas com qualidade de bebida equivalente às extraídas de grãos cafeinados.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - FRANCISCO DE ASSIS ALVES MOURÃO FILHO - USP (Membro)
Interno - GILVANO EBLING BRONDANI (Membro)
Presidente - LUCIANO VILELA PAIVA (Membro)
Externo à Instituição - RAFAELI APARECIDA VIEIRA DE SOUZA - UFLA (Suplente)