Banca de DEFESA: ISABELLE PONCIANO ALMEIDA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: ISABELLE PONCIANO ALMEIDA
DATA: 27/03/2023
HORA: 09:00
LOCAL: online
TÍTULO:

Utilização de marcadores SSR e ensaio Elisa como ferramentas para auxiliar na seleção de linhagens no melhoramento genético do milho.

PALAVRAS-CHAVES:

Zea mays, Retrocruzamento, Elisa

PÁGINAS: 69
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Agronomia
RESUMO:

A produção de milho (Zea mays) cresce continuamente, o que torna essa cultura um dos principais alvos da tecnologia dos transgênicos. Os transgênicos presentes no mercado objetivam a proteção da cultura ao ataque de pragas e à resistência a herbicidas, o que, consequentemente, eleva a produtividade. As linhagens transgênicas, desenvolvidas após a transformação genética, desempenham o papel de genitores doadores durante o processo de introgressão do novo transgene, nos programas de melhoramento. Estes doadores, são então cruzados com genitores recorrentes, os quais constituem linhagens com características agronômicas desejáveis. Os genótipos oriundos deste cruzamento são novamente cruzados com o parental recorrente, processo designado como retrocruzamento. Este processo de conversão pode ser estendido até que se obtenha linhagens com fixação satisfatória dos alelos do genitor recorrente e ao mesmo tempo, que expressem adequadamente o transgene da linhagem doadora. O uso da seleção assistida por marcadores (SAM) e de ensaios ELISA no melhoramento mostram-se ferramentas eficazes para auxiliar na seleção de linhagens durante o processo de melhoramento. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi verificar a eficiência do uso de marcadores moleculares microssatélites (SSR) e do ensaio ELISA para avaliação da taxa de fixação de alelos e quantificação da proteína transgênica, respectivamente, de populações, em diferentes estágios de conversão, referentes a 3 linhagens (L1, L2 e L3). Para avaliação da taxa de recuperação por SSR, foram conduzidas as extrações de DNA de cada indivíduo a ser analisado. O DNA foi então submetido à amplificação utilizando marcadores SSR, previamente selecionados de acordo com o perfil polimórfico entre genitores doadores e recorrentes. Os produtos de PCR obtidos foram avaliados em analisador genético e a partir dos resultados obtidos, foi feita a inferência da taxa de fixação dos alelos do genitor recorrente para cada linhagem analisada. Para avaliação da expressão do transgene, foi realizada a extração de proteínas totais. O extrato proteico obtido de cada linhagem foi utilizado para quantificação da proteína alvo utilizando ELISA competitivo. Os resultados demostraram que marcadores SSR e ELISA foram eficientes para auxiliar na seleção de linhagens que apresentem a porcentagem de recuperação do genótipo do genitor recorrente e expressão proteica. Com base na análise de similaridade genética, inferiu-se que a linhagem 1 apresentou recuperação entre 97,26 e 99,60% nas gerações RC4S3, RC5S2, RC6S1 e RC7. Por outro lado, a fixação observada na Linhagem 2 foi de 79,16% na geração Rc3S5, enquanto as gerações Rc6S1, Rc5S2 e Rc7 as taxas de recuperação variaram de 88,88% a 91,66%. Para a linhagem 3, as taxas de recuperação estimadas com base nos marcadores analisados, foram de 100,00, 100,00 e 88,58% nas gerações Rc3S5, Rc5S1 e Rc4S2, respectivamente. O ensaio Elisa apresentou eficiência para a detecção das concentrações proteicas de todos os indivíduos analisados. Além disso, foi constatado que nas linhagens L1 e L3 não houve variação da concentração de proteína entre indivíduos em diferentes estágios de conversão, indicando que os sucessivos retrocruzamentos não interferiram negativamente na expressão do transgene em estudo. No entanto, para as amostras analisadas da L2, a detecção proteica foi ineficiente e foi observada oscilação da concentração proteica entre diferentes estágios de conversão.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - WELISON ANDRADE PEREIRA (Membro)
Externo à Instituição - IZABEL COSTA SILVA NETA - N/D (Membro)
Interno - EVANDRO NOVAES (Suplente)
Externo à Instituição - CESAR MOISES CAMILO - ND (Suplente)
Externo à Instituição - AURINELZA BATISTA TEIXEIRA CONDÉ - EPAMIG (Membro)