Desenvolvimento de criogéis de troca iônica para a purificação de b-glicosidase de Aspergillus caespitosus
enzima; purificação; adsorção; criogel
As β-glicosidases (BGLs) são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações β-glicosídicas em dissacarídeos e oligossacarídeos, com aplicações na produção de agliconas a partir de isoflavonas, extração de óleos vegetais por processos sustentáveis, biorrefinarias para degradação de celulose e biossíntese de compostos aromáticos em bebidas. Além disso, destacam-se pelo potencial de transformação ambientalmente segura da biomassa em comparação a catalisadores químicos. Fungos filamentosos são amplamente utilizados como fontes comerciais dessas enzimas devido à sua alta produtividade. Este estudo tem como objetivo investigar o fungo Aspergillus caespitosus como produtor de BGL extracelular por fermentação submersa, desenvolver criogéis macroporosos funcionalizados com grupos ácido sulfônico ou sulfomoil para purificação da enzima por cromatografia de troca. A produção enzimática será conduzida em meio Czapeck Dox modificado, utilizando glicose como fonte de carbono, sob diferentes condições de pH (5,0 e 7,0), temperatura (25 °C e 40 °C) e tempos de incubação (72 h e 120 h). O extrato bruto extracelular obtido será filtrado e submetido a ensaios de adsorção utilizando criogéis macroporosos, sintetizados com 9,86% m/v de monômeros à -12 °C por 24 h e funcionalizados quimicamente. A purificação da BGL será realizada em colunas cromatográficas, avaliando parâmetros como capacidade adsortiva, eficiência de purificação e condições ótimas de operação. A quantificação da proteína total será realizada pelo método de Bradford e a atividade enzimática será determinada utilizando o reagente de Nessler. O criogel de troca iônica que apresentar melhor desempenho de adsorção será testado em coluna tricorn 10/100, avaliando-se o rendimento e fator de purificação. A pureza das amostras eluídas será avaliada por eletroforese