PURIFICAÇÃO DE L-ASPARAGINASE DE Aspergillus caespitosus CCDCA 11593 EM CRIOGEL DE TROCA IÔNICA
Adsorção; acrilamida; criogel; niacinamida; purificação; enzima
A L-asparaginase (EC 3.5.1.1) catalisa a hidrólise da L-asparagina em ácido aspártico e amônia, reduzindo a formação de acrilamida, um composto potencialmente carcinogênico, gerado na reação de Maillard entre açúcares redutores e L-asparagina. Para a purificação de enzimas, técnicas cromatográficas são amplamente empregadas, sendo os criogéis poliméricos matrizes consolidadas para esse processo, devido à sua elevada porosidade, capacidade adsortiva e volume de processamento. No entanto, modificações estruturais são necessárias para melhorar a eficiência da captura da biomolécula-alvo. Neste estudo, criogéis de poliacrilamida foram funcionalizados com niacinamida e aplicados na purificação de L-asparaginase de Aspergillus caespitosus CCDCA 11593 por cromatografia de troca iônica. Foram avaliados o efeito da estratégia de funcionalização dos criogéis (método epóxi e método do glutaraldeído), da concentração de tampão fosfato de sódio (0,050 e 0,100 mol/mL) e do pH (3,0; 5,0 e 8,0) na adsorção da L-asparaginase, buscando os maiores valores de capacidade adsortiva (q, mg/g) da enzima. Os criogéis funcionalizados com niacinamida (crio-GluNi) foram caracterizados quanto à morfologia, grupos funcionais, densidade de grupos epóxi, ponto de carga zero, propriedades mecânicas e térmicas. A captura cromatográfica por troca iônica foi analisada por isotermas de Langmuir, realizadas em diferentes temperaturas (7, 15, 25 e 35 °C) e diluições, permitindo a avaliação termodinâmica (ΔG°, ΔH° e ΔS°) e a compreensão do mecanismo e da espontaneidade da adsorção. Por fim, a proteína eluída foi analisada por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil de sulfato de sódio (SDS-PAGE), permitindo avaliar a seletividade da captura cromatográfica.