Influência da contagem folicular antral e fatores de crescimento na ativação e sobrevivência de folículos primordiais, densidade de células estromais, fibras colágenas e expressão gênica em tecidos ovarianos bovinos cultivados in vitro
ativação folicular, contagem folicular, folículos primordiais, gado.
Os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito do Fator de Crescimento Epidermal (EGF), Fator de Crescimento e Diferenciação-9 (GDF-9) e do Hormônio Folículo Estimulante (FSH) sobre a ativação, sobrevivência, crescimento in vitro de folículos primordiais bovinos, bem como investigar seus efeitos sobre a expressão de RNAm para os R-EGF, R- GDF-9 e R-FSH. Também serão investigadas suas possíveis interações com classes de contagem da população folicular antral (CFA). Inicialmente, ovários oriundos de matadouro serão classificados de acordo com a CFA em classes baixa (<15), intermediária (16-20) e alta (<21). Fragmentos de córtex ovariano serão cultivados in vitro por um ou sete dias em α-MEM suplementado com: 100 ng/mL de FSH, 10 ng/mL do EGF, 200 ng/mL do GDF-9, EGF (10 ng/mL) em associação com GDF-9 (200 ng/mL) e FSH (100 ng/mL) associado com EGF (10 ng/mL) e GDF-9 (200 ng/mL). No final do cultivo, os fragmentos serão fixados para histologia clássica. Em seguida, será avaliada a percentagem de folículos primordiais ou em desenvolvimento no controle não cultivado e no tecido ovariano cultivado nos diferentes tratamentos. Os tecidos provenientes do controle não cultivado ou após cultivo nos diferentes tratamentos serão fixados para microscopia eletrônica de transmissão. Além disso, para cada tratamento, serão coletadas amostras de tecido para avaliar o perfil de expressão de RNAs mensageiros para os receptores de EGF (R-EGF), GDF-9 (R-GDF-9) e FSH (R-FSH). Os dados serão submetidos ao procedimento UNIVARIATE (SAS) para teste de normalidade e posteriormente analisados em modelos mistos no procedimento PROCMIXED com efeitos de classe folicular, tratamento, dia e interações e ovário dentro de tratamento com erro aleatório. Dados proporcionais serão analisados pelo teste do qui quadrado com o procedimento GENMOD. O teste de Tukey será utilizado para comparar as médias. As diferenças serão consideradas significativas quando P < 0,05.