Banca de DEFESA: JESÚS ALFONSO SÁNCHEZ VIAFARA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: JESÚS ALFONSO SÁNCHEZ VIAFARA
DATA: 14/02/2019
HORA: 08:00
LOCAL: Sala de Reuniões PPGCV
TÍTULO:

MELHORIA DO DESENVOLVIMENTO E CRIORESISTÊNCIA DE EMBRIÕES BOVINOS PRODUZIDOS in vitro COM ADIÇÃO DE MODULADORES DA APOPTOSE CELULAR E DA SÍNTESE LIPÍDICA

PALAVRAS-CHAVES:

PPARD. Embrião. Bovinos. L-165041. DHA.

PÁGINAS: 125
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Medicina Veterinária
RESUMO:

 A produção de embriões bovinos in vitro é deficiente devido a aspectos tais como as condições subotimas onde se desenvolvem, o qual induz a apoptose o qual conduz a uma baixa criotolerância. Objetivou-se modular a ativação da apoptose e a síntese lipídica via ativação dos receptores proliferadores para diminuir a apoptose celular e aumentar a criotolerancia. No experimento 1 foram colocados para cultivo embrionário aleatoriamente presumíveis zigotos dia 1 (grupo controle n=609; grupo DHA n=611; e grupo L165041 n=608). A taxa de clivagem foi avaliada no dia 2 (D2) e a produção de blastocistos no dia 7 (D7). Para avaliar a taxa de apoptose pre vitrificação foram fixados embriões no D7 para o ensaio de TUNEL. O acumulo lipídico foi analisado pela técnica de Sudan Black em embriões fixados no D7. No experimento 2 foram vitrificados e desvitrificados (grupo controle n=98; grupo DHA= 76; L-165041= 111) para avaliar a taxa de eclosão. Aqueles embriões que eclodiram foram congelados para analisar o perfil lipídico pela técnica de espectrometria de massa (MALDI-MS). A taxa de apoptose pos vitrificação foi analisada pelo ensaio de TUNEL. As análises estatísticas foram realizadas análises de deviance considerando modelos lineares mistos generalizados, sendo o efeito do dia de coleta (bloco) considerado como aleatório. Para as variáveis referentes a contagens foi considerada a distribuição Poisson e função de ligação log. Nos casos de variáveis que representam taxas foi utilizada a distribuição binomial e função de ligação logit. No estudo da criotolerância foi realizada uma análise de deviance da taxa de eclosão para cada um dos tempos avaliados, nos casos de significância do efeito dos tratamentos, foi aplicado o teste de Dunnett para comparar os tratamentos. Foram utilizados os modelos estatísticos multivariate e univariate para o analise de MALDI-MS.Todas as análises foram executadas utilizando o Proc GLIMMIX do software SAS (SAS Institutee, Cary, NC, USA). No experimento 1a produção de blastocistos em D7 foi menor no grupo DHA quando comparada com a produção dos grupos controle e L-165041 (P < 0.05). Por outro lado, a proporção de células da MCI foi maior, e as taxas de apoptose total e da MCI foram menores no grupo L-165041 quando comparado com os grupos controle e DHA (P < 0,05). Por sua vez, o grupo DHA teve a menor proporção de MCI e as maiores taxas de apoptose total e da MCI quando comparado com os grupos controle e L-165041 (P < 0,05). No grupo DHA, as mitocôndrias exibiam sinais de estresse celular, assim como várias células apresentaram vacuolização intensa. A taxa de apoptose total e da massa celular interna foi reduzida (P<0,05) no grupo L-165041, quando comparada com o grupo DHA e controle. No experimento 2 as taxas de eclosão das 36h às 72h após desvitrificação foram maiores (P < 0.05) no grupo L-165041 comparado com o grupo controle, e a partir das 48h com o grupo DHA. Foi encontrado uma abundancia relativa das fosfatidilcolina (PC) protonada (34:2) + H]⁺ e PC oxidado [PC (36:1) + H]⁺ no grupo L-165041 comparado com o grupo controle. O grupo DHA teve uma abundância relativa (P <0.05) da PC protonada (32:0) comparado com o grupo controle. Em conclusão a adição de L-165041 no cultivo embrionário diminui a apoptose pre e pos vitrificação. Nosso estudo indica que a adição de 1µM de L-165041 no meio de cultivo aumenta a proliferação celular pre vitrificação e diminui a apoptose pre e pôs vitrificação, além de aumentar a criotolerância. Por outra parte a adição de DHA diminui o desenvolvimento embrionário não sendo aconselhável o uso deste na PIVE nas condições deste estudo.

 

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - JOSE CAMISAO DE SOUZA
Interno - MARCIO GILBERTO ZANGERONIMO
Interno - NADJA GOMES ALVES
Externo ao Programa - ANTONIO CHALFUN JUNIOR - DBI
Externo à Instituição - MARCOS BRANDAO DIAS FERREIRA - EPAMIG
Externo à Instituição - MATEUS JOSÉ SUDANO - UFABC
Externo à Instituição - MARCELLA PECORA MILAZZOTTO - UFABC