Banca de DEFESA: CLEUDISON GABRIEL NASCIMENTO DA SILVA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: CLEUDISON GABRIEL NASCIMENTO DA SILVA
DATA: 28/04/2022
HORA: 08:00
LOCAL: remoto
TÍTULO:

MONITORAMENTO DE RIZÓBIOS ELITE INOCULADOS NO FEIJÃO COMUM UTILIZANDO PCR E qPCR

PALAVRAS-CHAVES:

Phaseolus vulgaris L. Rizóbios elite. Detecção. Quantificação.

PÁGINAS: 252
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Agronomia
SUBÁREA: Fitossanidade
ESPECIALIDADE: Microbiologia Agrícola
RESUMO:

O feijoeiro comum é uma planta capaz de realizar simbiose com rizóbios, de modo que a Fixação Biológica do Nitrogênio é uma alternativa sustentável à utilização de adubos nitrogenados para a cultura. No entanto, o sucesso da simbiose com bactérias inoculantes depende de diversos fatores bióticos e abióticos, dentre eles a competitividade das estirpes inoculantes frente á microbiota natural existente no solo. Uma forma de acessar essa competitividade é pela avaliação da ocupação nodular e persistência da bactéria no solo. Porém os métodos atualmente existentes são muito laboriosos e/ou não apresentam especificidade suficiente para diferenciar as estirpes inoculadas de bactérias nativas. Entretanto, a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e suas variantes permitem com maior praticidade o monitoramento e a quantificação de microrganismos associados a plantas e/ou no solo. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi desenhar e validar primers estirpe-específicos para detectar e quantificar as bactérias Rhizobium tropici estirpe CIAT 899 e CPAC H12 e R. freirei estirpe PRF 81 utilizando as técnicas de PCR e PCR em Tempo Real (qPCR). Para tal, os primers foram desenhados a partir de genes funcionais selecionados in silico de modo a conter sequências de DNA exclusivamente encontradas no genoma de cada uma das estirpes alvo. O processo de validação desses primers na PCR envolveu teste de especificidade exclusiva com outras bactérias geneticamente próximas e distantes das estirpes alvo desse estudo, ensaios de PCR envolvendo diversos extratos de DNA e avaliação da ocupação nodular do feijoeiro a partir de experimento em casa de vegetação. Para aplicação na técnica de qPCR cada par de primer foi avaliado, principalmente, quanto á eficiência de amplificação e curva de dissociação, e posteriormente, quantificação das estirpes alvo a partir das amostras de DNA isoladas de raízes e solo rizosférico do feijoeiro comum cultivado em condições de casas de vegetação. Por fim, os pares de primers foram testados quanto á sua aplicabilidade em experimentos de campo para avaliação da taxa de ocupação nodular bem como quantificação da população de rizóbios elite em solo rizosféricos e raízes do feijoeiro comum. Essas informações permitiram discorrer sobre os dados de nodulação e fitotécnicos inerentes á interação rizóbio-planta, bem como, a aptidão das estirpes CIAT 899, CPAC H12 e PRF 81 para nodular o feijão comum.

MEMBROS DA BANCA:
Interno - VICTOR SATLER PYLRO (Membro)
Externo à Instituição - RAFAEL MAZER ETTO - UEPG (Membro)
Externo à Instituição - JEAN LUIZ SIMOES DE ARAUJO - EMBRAPA (Membro)
Externo à Instituição - ENDERSON PETRONIO DE BRITO FERREIRA - EMBRAPA (Membro)
Presidente - EDERSON DA CONCEIÇÃO JESUS - EMBRAPA (Membro)
Externo à Instituição - DÂMIANY PÁDUA OLIVEIRA - UFLA (Suplente)
Externo à Instituição - CLEITON DE PAULA SOARES - UFRJ (Suplente)